La técnica del patch clamp

La técnica del patch clamp fue descrita por Neher y Sackmann en 1983 (1). La eficiencia de esta técnica  requiere que la membrana esté libre, es decir, separada de otras células, libre de tejido conjuntivo, de restos celulares, etc, para que de esta forma, la pipeta se pueda adherir de una manera eficiente a la membrana celular. 
Las pipetas son preparadas a partir de capilares de vidrio de borosilicato y confeccionadas a través de un puller, el cual es programado para dividir el capilar en dos, generando así en el sector de la división, finísimas puntas, las que más tarde serán refinadas con calor para suavizar el contorno, lo que también permitirá una mejor adhesión del vidrio a la membrana.
Una vez que el vidrio hace contacto con la membrana, se aplica una suave succión lo que permite que parte de la membrana se invagine en la pipeta provocando una firme unión entre la membrana y el vidrio,  generando un aumento en la resistencia desde unos pocos meha ohm a valores que superan el giga ohm. De esta forma se produce un aislamiento perfecto entre la pipeta y la región de la membrana que se mantiene adherida, haciendo posible que se realicen cambios de potencial sólo en esta región aislada. 


Las diferentes configuraciones del patch clamp, faculta al investigador a:

  • Estudiar los canales iónicos en diferentes niveles, por ejemplo, se peude tanto utilizar la técnica de whole cell (célula completa) para analizar la actividad de todos los canales de la célula como realizar registros de canal único.

  • Manipular fácilmente la composición tanto del medio extracelular como del intracelular durante un registro.
 Los diferentes modos del patch clamp son:

  1. Cell attached (adherida a la célula)
  2. Whole cell (célula completa)
  3. Outside out (exterior hacia afuera)
  4. Inside out (interior hacia afuera)
Los modos 3 y 4 pertenecen a la configuración de parche escindido.


No hay comentarios:

Publicar un comentario